Diferența dintre Ligaza T4 și T7 ADN

Diferența cheie - T4 vs T7 DNA Ligase
 

ADN-ligaza este o enzimă importantă utilizată în tehnicile de biologie moleculară. Acesta funcționează ca un adeziv molecular care leagă nucleotidele prin formarea de legături fosfodiesterite între nucleotide. Legăturile fosfodiestere se formează între capătul 3 'hidroxil al restului de zahăr și grupa fosfat de capăt 5'. Ligaza ADN este vitală în procesul de replicare pentru a se alătura fragmentelor Okazaki ale catenei rămase și în timpul mecanismelor de reparare a ADN și in vitro experimente de donare pentru a se alătura genelor dorite de genomul vectorului. Există două ligaze ADN principale utilizate în prezent de biologi moleculari: liganzii T4 și T7 ADN. T4 ADN ligaza este una dintre primele enzime care urmează să fie izolate de bacteriofagul T4. Ligatura ADN T7, care este o proteină mai mică, este o enzimă izolată de bacteriofagul T7. Aceasta este diferența cheie între liganzii ADN T4 și T7.

CUPRINS

1. Prezentare generală și diferență cheie
2. Care este acțiunea ADN-ului Ligase
3. Ce este T4 ADN Ligase
4. Ce este T7 ADN Ligase
4. Asemănări între T4 și T7 ADN Ligază
5. Comparație comparație comparativă - T4 vs T7 ADN Ligază în formă tabulară
6. rezumat

Care este acțiunea ADN-ului Ligase?

Ligarea ADN are loc într-o reacție în trei etape. Prima etapă este un atac nucleofil asupra alfa-fosforului ATP care generează un intermediar enzimatic-adenilat covalent în care AMP este legat la azotul lizinei cu catenă laterală terminală. În a doua etapă, apare un atac nucleofil asupra fosforului enzimei-adenilat de substratul de ADN terminat cu 5'-fosfat, eliberând lizina și formând adenilat de ADN. În etapa finală, ADN-adenilatul este atacat de 3'-OH al altei catene de ADN, eliberând AMP și îmbinând polinucleotidele.

Ce este T4 ADN Ligase?

T4 Ligaza a fost prima ligază care a fost izolată și identificată de Meselson, Weigle și Kellenberger și a fost prima ligază comercială produsă vreodată. T4 ADN ligaza este o enzima dependentă de ATP care catalizează formarea legăturii fosfodiestere. Este un lanț polipeptidic unic cu resturi de 487 de aminoacizi și are o greutate moleculară de aproximativ 77 kDa. PH-ul optim pentru activitatea sa se situează în intervalul 7,5 - 8.

Figura 01: Ligaza ADN T4

T4 ADN Ligase, așa cum sugerează și numele său, este prezent în bacteriofagul T4 și a fost izolat atunci când fagul a produs enzima după infectarea cu -E coli. Enzima leagă duplexurile de ADN dublu catenar cu capete bont și fragmentele care trebuie legate trebuie să fie în imediata apropiere a fiecăruia.

Ce este T7 ADN Ligase?

T7 ligaza este proteina de 41 kDa produsă de T7 Bacteriophage și este izolată prin infectare E coli celule. Funcția principală a ligazei T7 este de a lega duplexuri ADN prin intermediul legăturilor fosfodiesterale și de a se alătura fragmentelor de ADN din apropiere în timpul experimentelor de clonare. PH-ul optim pentru ADN ligand T7 se situează în intervalul de la 7,0 la 7,2. Ligaza T7 este dependentă de ATP. Ligazele ADN T7 sunt, de asemenea, capabile de a aduna hibrizi ADN și ARN, dând naștere la conformări anormale în timpul transcrierii; cu toate acestea, acest fenomen este încă în curs de cercetare de către in vitro studiu.

Care sunt asemănările dintre T4 și T7 DNA Ligase?

• T4 și T7 ADN-ul Ligază participă la o reacție de ligare prin annelarea duplexelor ADN prin formarea legăturii fosfodiesterale între capătul 3'OH și capătul fosfat 5 'al fragmentului ADN.
• Ambele enzime leagă duplexuri de ADN cu capăt închis, care se află în imediata vecinătate.
• Ambele enzime sunt dependente de ATP.
• Aceste enzime sunt izolate prin infectare E coli celule cu bacteriofagul special.
• Aplicațiile ambelor enzime includ:
  • Clonarea moleculară - pentru a lega genele de interes vectorului
  • Repararea ADN-ului - pentru a repara nișe dublu crăpate
  • Reproducerea ADN in vitro
  • Reacția în lanț a ligazei

Care este diferența dintre T4 și Ligaza ADN-ului T7?

T4 vs T7 DNA Ligase
T4 ADN Ligaz de tip ADN ligazic izolat din bacteriofagul T4 și este implicat în ligarea fragmentelor ADN adiacente prin formarea legăturii fosfodieste.	Tipul T7 ADN ligand tip Ligase izolat din bacteriofagul T7 și este implicat în ligarea fragmentelor ADN adiacente prin formarea de legături fosfodiesterol.
Dimensiunea proteinei
Dimensiunea ligandului ADN T4 este de 77 kDa - mai mare comparativ cu ligaza ADN T7.	Dimensiunea ligandului ADN T7 este de 41 kDa.
PH optim
Intervalul de pH care funcționează AD4 ligaza T4 este de 7,5 - 8,0.	Intervalul de pH care funcționează AD ligaza T7 este de 7,0 - 7,2.

Rezumat - T4 vs T7 DNA Ligase

Ligazele ADN sunt o clasă importantă de enzime implicate în clonarea moleculară pentru a produce molecule de ADN recombinant care conțin gena de interes. Reacția de legare este o reacție care utilizează energia și există studii de cercetare noi în curs de desfășurare pentru a îmbunătăți acuratețea prin modularea ligazelor disponibile. Ligazele ADN T4 și T7 sunt două tipuri de enzime ADN ligază importante în tehnicile biologice moleculare. Ligatura ADN T7 este, de asemenea, un rezultat al cercetării care se bazează pe ligaza primară izolată din T4 infectată E coli. T7 este reprezentat mai multă eficiență și precizie în îndeplinirea funcției sale datorită dimensiunilor sale mai mici. Aceasta este diferența dintre ligandul T4 și T7.

Descărcați versiunea PDF a T4 vs T7 DNA Ligase

Puteți descărca versiunea PDF a acestui articol și o puteți utiliza în scopuri offline ca pe note de citare. Descărcați PDF versiunea aici Diferența dintre T4 și T7 Ligase.

Referințe:

1. "DNA Ligase, T4." ADN Ligase, T4 - Worthington Enzyme Manual, Disponibil aici. Accesat 22 august 2017.
2. Doherty, Aidan J., și colab. "Bacteriophage T7 DNA Ligase OVEREXPRESIE, PURIFICARE, CRISTALIZARE ȘI CARACTERIZARE." Journal of Biological Chemistry, 10 mai 1996, Disponibil aici. Accesat 22 august 2017.

Datorită fotografiei:

1. "Figura 3. Ligația Ligazică a ligandului ligazic T4 ADN monocatenar. (CC BY 3.0) prin intermediul Commons Wikimedia